专家详解：尖锐湿疣hpv的检查诊断

文章来源：郑州国丹性传播疾病诊疗中心

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　　【导语】：尖锐湿疣hpv的检查方法有很多，但检查方法也是按病情分类的，如果尖锐湿疣在潜伏期阶段最好用细胞学检查方法，如果是已经出现了尖锐湿疣的症状一般通过观察就能诊断，下面介绍几种检查方法患者可以依据所在地的医疗条件进行选择性检查。

　　【病理诊断】在临床上，醋酸白试验是诊断尖锐湿疣科学精准的试验检查

　　醋酸白试验：用3%-5%的醋酸溶液浸湿的纱布包住，敷贴在可疑的皮肤或黏膜表面，3-5分钟之后取下，典型的尖锐湿疣损害会呈现白色丘疹或疣赘状物，亚临床感染表现为白色的斑片或斑点。醋酸白试验对确认早期尖锐湿疣损害及亚临床感染是一个简单易行的检查方法。醋酸白试验简单易行，是是尖锐湿疣患者的一个常规检查手段，有助于确定病变的范围，进行指导治疗。

　　尖锐湿疣是一种常见的传染性性病。那么你知道日常生活中，对于尖锐湿疣有哪些检查诊断方法呢?尖锐湿疣是感染人类乳头瘤病毒(HPV)而引起的一种表皮瘤样增生。尖锐湿疣的诊断多根据皮疹特点、发病部位、发展情况结合可能询及的接触史来判断，但少数病人要进行一些辅助实验来确诊。具体实验诊断方法介绍如下：

　　一、醋酸白试验：用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟，病灶部位变白稍隆起，肛门病损可能需要15分钟。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果，HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同，只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高，它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示，醋酸白试验并不是特异试验，且假阳性较常见。

　　二、免疫组织学检查：常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法(即PAP)，显示湿疣内的病毒蛋白，以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时，尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。

　　三、组织化学检查：取少量病损组织制成涂片，用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原，则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)方法中，核可被染成红色。此法特异性强且较迅速，对诊断有帮助。

　　四、病理检查：主要为角化不全，棘层高度肥厚，乳头瘤样增生，表皮突增厚，延长，其增生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似AI-G变。但细胞排列规则，且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大，胞浆着色淡、中央有大而圆，深嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣，表皮极度向下生长，代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混，故须多次活检。若有缓慢发展之倾向，则为一种低度恶变的过程，即所谓疣状AI-G。

　　五、基因诊断：迄今，HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测，主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，为HPV检测开辟了新途径。

　　(一)标本的采集及处理

　　1.标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS离心(3000g，10min)洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提。

　　2.标本核酸的提取：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/LTris-HCl，pH7.4，10mmol/LEDTA，150mmol/LNaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿(1:1)，氯仿/异戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10体积3mol/LNaAc(pH5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20℃2h或过夜沉淀DNA;加1体积乙醇洗涤1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/LTris-HCl，pH8.0，1.0mmol/LEDTA)溶解DNA，37℃温育。

　　(二)PCR扩增

　　1.引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L)，每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明，各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1，该引物与HPV6、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型。

　　2.PCR反应试剂：TaqDNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/LdNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L)，10×PCR缓冲液(500mmolKCl、40mmol/LMgCl2、100mmol/LTris-HCl、pH8.5)，100μmol/LMY11和MY09贮备液，灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。

　　(三)扩增产物的检测和分析

　　1.凝胶电泳：扩增反应结束后，取出反应管，冷却至室温，取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外分析仪下分析结果，分子量约为450bp处出现明显的DNA带。

　　2.核酸杂交：如果凝胶电泳无清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时，可用标记的公用混合探针和(或)型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。

　　3.按照标准方法制32PATP标记的寡核苷酸探针，需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×106-5×106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交2-3h，随后于30-55℃下用洗涤液(2×SSC、0.1%SDS)迅速冲洗杂交膜，除去多余探针。然后进行洗膜，其条件依所用探针而异：公用混合探针，55℃洗膜10min;MY12、MY13及MY16探针，56-57℃下10min，并换液重洗1次;MY14及WD74探针，58-59℃下10min，亦换液重洗1次。

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